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「受託分析」＞「テクニカルノート」＞「N-ピログルタミル基デブロッキング処理からの N末端アミノ酸配列解析 (α-amylase : 40 pmol)」
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N末端グルタミン酸およびグルタミンは環化され、ピログルタミン酸となることがある。この変換反応は in vivo のみならず in vitro でも起こり、エドマン分解によるN末端アミノ酸配列分析を行うことができない。その場合、N末端配列分析を行うためには、ピログルタミル基の除去が必要となる。
1. α-amylase (40 pmol) の デブロッキング処理（脱ピログルタミル化）
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α-amylase※ は N末端がピログルタミル化されたタンパク質の1つである。そこで、α-amylase (40 pmol) を PVDF 膜にブロッティングし、ピログルタミン酸の選択的除去酵素である Pfu Pyroglutamate Aminopeptidase (TaKaRa) を用いたデブロッキング処理を行った。
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※ ： α-amylase from porcine pancreas [40 pmol]
（pyroGlu-Tyr-Ala-Pro-Gln-Thr-Gln-Ser-Gly- ・・・ = 496 aa） |
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2. 脱ピログルタミル化 α-amylase (40 pmol) のN末端アミノ酸配列分析
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以下の結果より、N末端ピログルタミン酸除去後のアミノ酸配列を Tyr-Ala-Pro-Gln-Thr と同定できた。
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Sample |
： 脱ピログルタミル化 α-amylase (40 pmol)
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Sequencer |
： HP G1005A
(Hewlett Packard) |
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Program |
： R 3.1 PVDF (1718)
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cycles |
： 5
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cycle
no. |
amino
acid |
pmol |
| 1 |
Y |
2.8 |
| 2 |
A |
4.2 |
| 3 |
P |
2.3 |
| 4 |
Q |
3.4 |
| 5 |
T |
1.6 |
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