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「受託分析」＞「テクニカルノート」＞「N-アセチル基デブロッキング処理からの N末端アミノ酸配列解析 (ADH : 50 pmol)」
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ほ乳類細胞では、N末端がブロックされたタンパク質の80%以上がアセチル化されたタンパク質であるといわれ、そうしたタンパク質は、エドマン分解によるN末端アミノ酸配列分析を行うことができない。N末端がアセチルセリン、アセチルトレオニンの場合は、TFA によってデブロックすることができる。
1. ADH (50 pmol) の デブロッキング処理（脱アセチル化）
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ADH※ は N末端セリンがアセチル化されたタンパク質の1つである。そこで ADH (50 pmol) を PVDF 膜にブロッティングし、TFA を用いたデブロッキング処理を行った。
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※ ： Alcohol dehydrogenase from horse liver [50 pmol]
（Ac-Ser-Thr-Ala-Gly-Lys-Val-Ile-Lys- ・・・ = 374 aa） |
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2. 脱アセチル化 ADH (50 pmol) のN末端アミノ酸配列分析
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以下の結果より、N末端アミノ酸からの配列を Ser-Thr-Ala-Gly-Lys-Val-Ile-Lys-(Cys)-Lys と同定できた。
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Sample
Sequencer
Program
cycles |
： 脱アセチル化 ADH (50 pmol)
： Procise 494 HT
(Applied Biosystems)
： #PL PVDF Protein
： 10
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cycle
no. |
amino
acid |
pmol |
| 1 |
S |
7.6 |
| 2 |
T |
5.0 |
| 3 |
A |
6.7 |
| 4 |
G |
5.6 |
| 5 |
K |
4.5 |
| 6 |
V |
6.9 |
| 7 |
I |
4.2 |
| 8 |
K |
3.7 |
| 9 |
(C) |
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| 10 |
K |
3.5 |
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